第204章 医学泰斗

孙长明就像个路过的npc，丢下几句毫无杀伤力的台词后就自己退场了。

关于无能的丈夫这一块……

陈浩还要说：“好像看见孙教授关门的时候捂着胸口，不会有事吧？”

易向晚：“没事，应当是受了点内伤，回去休养几天就好了，咱们继续工作吧。”

陈浩和易向晚，人走了还要补刀！

而且刚才正是陈浩一脸无辜地提出字字诛心的问题。

这个陈浩，怎么这么坏啊！

……

重新开始实验。

nanodrop上几组数据都很完美。

王晓晴乖巧请教：“江河，接下来怎么做？”

目前浓度和纯度虽然达标了，但irna片段太短。

传统的逆转录实验，一般都是用oligo(dt)引物去抓rna尾巴上的poly-a结构。

可是irna根本没有这种长尾巴，常规的逆转录引物根本抓不住它。

这在08年又是一个技术难题。

全世界的实验室都在寻找一种高效特异的办法，把这短短二十几个碱基的片段给稳定地逆转录出来。

江河道：“之前讲过茎环引物，当然，后入组的组员来得晚不知道，陈浩，你给大家简单讲讲。”

“ok啊。”

陈浩道：“这个引物分为两部分，后面是一个能够自我互补打折形成的茎环结构，它的作用是提供空间位阻，增加稳定性；前面伸出来一小段，大概6到8个碱基，这段序列和我们要抓的特异性irna的3端完全互补。”

王晓晴点点头：“明白了，引物前端这几个碱基先跟irna的尾巴精准结合，然后逆转录酶就可以用这个双链结构作为起始点，一路把irna的互补链给合成出来。”

杨煦很想插嘴装逼。

可这一段江河还没教他。

他也不会啊。

只能悻悻放弃。

陈浩则感觉很爽。

——没想到吧！自己也有给教授上课的一天！

他笑了笑，接着说：

“不仅如此，茎环结构在室温下是折叠闭合的，只有在结合了目标irna后才会打开，这会极大降低引物结合到其他杂质rna上的概率，特异性会呈指数级上升。”

陆晓林补充：“对了，引物序列老大已经设计好了，今天早上刚送到。”

他拉开旁边的一个抽屉，拿出一排装在冰盒里的离心管。

江河看了眼，点点头道：“现在配置逆转录体系，16度30分钟让引物结合，42度30分钟逆转录，最后85度5分钟灭活酶。”

“收到！”

一个多小时后。

逆转录程序跑完，酶被灭活。

接下来是最紧张的验证环节。

上机，跑qpcr（实时荧光定量pcr）。

众人屏息凝神，迅速配好荧光定量体系，将满载着希望的八排管放进了旁边那台abi 7500定量pcr仪中。

显示器。

第18个循环。

荧光信号突然爆发，拉出了一道完美平滑的扩增曲线！

一个多小时后，40个扩增循环全部结束，机器进入最后的升温阶段。

紧接着跑出来的熔解曲线，呈现出极为漂亮的单一峰型！

这意味着，

江河团队极其精准地抓住了irna，并成功将其逆转录！

实验室里爆发出一阵欢呼。

其实项目推进到这里，就已经可以向外发论文了，光是这一步，都是非常了不起的一步！

江河脑海中的进度条再次往上狠涨十个百分点。

【irna胰腺癌早筛项目进度：45……】

技术难点突破。

进度稳步推进。

江河很满意，道：“行了，体系跑通了，剩下的就是重复验证，大家先停手，休息二十分钟。”

众人纷纷休息，庆贺，揉肩膀的揉肩膀，喝水的喝水。

易向晚讲起了自己珍藏的矮人笑话，顾亦舟表示懒得管。

周洋和林月找了个角度复盘。

因为他们两个是本科大三，而且才进组，基础薄弱。

前面很多操作环节他们根本插不上手，只能在旁边打杂记录。

这会儿闲下来了，周洋拿了个废弃的枪头盒当教具，一边比划一边小声给林月复盘：

“你看啊，老大刚才说的那个茎环，我个人理解嗷，就像这个盒子的盖子，平时它是关着的，等碰到了那个短的irna，咔哒一下，它就咬住了，然后酶就顺着跑过去……”

林月像小鸡啄米一样：“确实，确实。”

周洋：“不对不对，这个举例不好，我换个说法……”

林月继续点